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雙縮脲法蛋白含量測試盒

簡要描述:

雙縮脲法蛋白含量測試盒強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。

更新時間:2024-09-02;廠商性質:經銷商;覽量:950

商品詳情:
雙縮脲法蛋白含量測試盒

貨號

規格

檢測方法

YSH3396

100管/96樣

微量法

YSH3396-1

50管/48樣

可見分光光度法

測定原理

強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質,適用于蛋白質濃度高的樣品,尤其是動物材料。

試劑組成和配置

1、雙縮脲試劑×1瓶,4℃保存;

2、10mg/ml標準蛋白×1支,-20℃保存;

3、標準蛋白配制:取10mg/ml標準蛋白100μl加雙蒸水100μl,即得5mg/ml標準蛋白溶液。
樣品中AA提取:

1.按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行室溫勻漿,然后轉移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測。

2.細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3.血清等液體:直接檢測。

計算公式如下:

1、血清(漿)LAP活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細菌或細胞中LAP活力的計算:

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

3)按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;ε:對硝基苯胺摩爾消光系數,9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;2000:細菌或細胞總數,2000萬。

注意事項:

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標準品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內使用完畢。

2. 為保證實驗結果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應在570nm處無吸收峰,因此,570nm處測定結果不含這兩種氨基酸的量。

4.檢出限為100μmol/L。

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50管/48樣果糖1,6二磷醛縮酶(FBA)測試盒/分光光度法

100T/96S果糖1,6二磷醛縮酶(FBA)測試盒/微量法

50管/48樣果糖-6-磷果糖激酶(PFK)/6-磷果糖激酶/果糖-6-磷激酶測試盒/分光光度法

100管/96樣果糖-6-磷果糖激酶(PFK)/6磷果糖激酶/果糖6磷激酶測試盒/微量法

50管/48樣果糖測試盒/比色法

50管/48樣果糖含量測試盒/分光光度法


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